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【儀器網(wǎng) 使用手冊】高效液相色譜儀主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量較大的有機(jī)化合物。該儀器主要由溶劑輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)(色譜柱)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理與記錄系統(tǒng)組成，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究及環(huán)境研究等領(lǐng)域。
工作原理：
儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)過進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測結(jié)果。
使用時的常見問題：
1、渦流擴(kuò)散
如果柱裝填不均勻，流動相的速度就快；有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流動速度就慢，多條流路有快有慢就會使區(qū)帶變寬。因此固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，渦流擴(kuò)散小，柱效率高。
2、分子擴(kuò)散
分子擴(kuò)散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運動，也稱縱向分子擴(kuò)散。若要減少分子擴(kuò)散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時，如果流速太慢被分離物質(zhì)停留時間長，則擴(kuò)散嚴(yán)重。
3、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
被分離物質(zhì)要在流動相與固定相中平衡，這樣才能形成較窄的區(qū)帶。液相色譜中，溶質(zhì)分子要在兩個液相之間進(jìn)行分配或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。流速快時，轉(zhuǎn)移速度慢，來不及達(dá)到平衡動相就會移動，這種物質(zhì)的非平衡移動會使區(qū)帶變寬。
4、動相流速
當(dāng)流速太低時，分子擴(kuò)散嚴(yán)重，特別是在氣相色譜中尤為突出。如果將理論塔板高度對流速作圖，理論塔板高度隨流速增加而快速下降，達(dá)到低值時，流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用，理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中，流速稍快影響不大，但在凝膠過濾色譜中，因為物質(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部，所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大，流速加大會降低柱效率。
5、固定相顆粒大小
固定相顆粒越小柱效率越高，對流動相流動的阻力越大，需要加大壓力才能使它流動。
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