T4 DNA 連接酶 常用試劑
別名
T4 DNA連接試劑盒
英文名稱
T4 DNA ligase
規(guī)格
60U
儲存條件
-20℃
單位
瓶

T4 DNA 連接酶  常用試劑

T4 DNA 連接酶  常用試劑產(chǎn)品說明：

該酶在以ATP 做輔酶的情況下，可以催化相鄰DNA 鏈的 5'-磷酸集團(tuán)和 3'-羥基之間的鏈接反應(yīng)。平末端和粘性末端均可。此酶液可以催化雙鏈 RNA 與雙鏈 DNA 連接，但不能催化單鏈核酸的連接。 

活性單位定義：

1 個 Weiss 活性單位是指在 ATP-PPi 交換反應(yīng)中，37℃ 、20min 內(nèi)將 1nmol[32PPi]轉(zhuǎn)換為 Norit 可吸收形式所需的酶量。1 個 Weiss 活性單位相當(dāng)于約 200 個粘性末端連接單位。1 個粘性末端連接 單位 ：20μL 反應(yīng)體系 ( 50mM Tris-HCl pH7.5 ) ， 10mM MgCl2 ， 10mM DTT, 1mM ATP,25μg/ml BSA,0. 12μM (300μg/ml 的 5'DNA 末端)中，在 16℃、30min 內(nèi) 50%連接 Hind III 酶切的 Lambda DNA 產(chǎn)物所需要的酶量。

注意事項(xiàng)：

1 、載體 DNA 和連接片段的摩爾比：對于不同的載體和DNA 片段，要取得成功的連接，應(yīng)分別建立具有不同摩爾數(shù)比例的連接反應(yīng)，在大多數(shù)情況下，DNA 片段的摩爾數(shù)應(yīng)控制在載體 DNA摩爾數(shù)的3- 10倍。 

2 、10×T4 DNA Ligase Buffer 中含有 ATP，為避免 ATP 的降解，建議解凍后分裝凍存于-20℃。10×T4DNA Ligase Buffer 在融解時，如果出現(xiàn)少量沉淀屬正?，F(xiàn)象，請顛倒混勻后使用。 

3 、平末端的載體與 DNA 片段連接時，應(yīng)首先對載體進(jìn)行去磷酸化，以防止載體自身環(huán)化。 

注意：如果向反應(yīng)體系中加入 PEG 可以促進(jìn)平末端的連接，但 PEG 可能導(dǎo)致cDNA 片段克隆產(chǎn)物出現(xiàn)串聯(lián)體并抑制包裝的反應(yīng)。