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CA1610 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 常用溶液

參考價(jià)1600.00
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱(chēng) 上海索寶生物科技有限公司
  • 品牌 Solarbio索萊寶
  • 型號(hào) CA1610
  • 所在地 北京市
  • 廠(chǎng)商性質(zhì) 代理商
  • 更新時(shí)間 2024/4/12 17:13:06
  • 訪(fǎng)問(wèn)次數(shù) 68
規(guī)格
300T1600.00元999 瓶可售

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羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 常用溶液
別名
羅丹明鬼筆環(huán)肽
英文名稱(chēng)
TRITC Phalloidin
規(guī)格
300T
分子式
C60H70N12O13S2
分子量
1231.4
有效期
1年
儲(chǔ)存條件
-20℃
單位

詳細(xì)信息 在線(xiàn)詢(xún)價(jià)

羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 常用溶液

羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 常用溶液

鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)是一種來(lái)源于毒蕈類(lèi)鬼筆鵝膏(Amanita phalloides)的環(huán)狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin,而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合,通常用來(lái)標(biāo)記組織切片,細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞體系中的F-actin,從而對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析。另外,鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維,無(wú)論是動(dòng)植物來(lái)源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,按照每一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略,染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識(shí)度非常明顯。因此,鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動(dòng)蛋白(Actin)抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng);鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì);以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白(微絲)的解離,穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為T(mén)RITC(四甲基異硫氰酸羅丹明)標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對(duì)比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè)。另外,經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒(méi)有物種差異性,適用性廣泛。

1. 工作液準(zhǔn)備

本品以溶于甲醇的 20µM 儲(chǔ)存液形式提供,總量為 300µl。按照 100 nM 的工作液濃度來(lái)?yè)Q算,可制備總量為 60 ml 的工作液。建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量,對(duì)母液進(jìn)行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。開(kāi)始實(shí) 驗(yàn)前,使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為:80~200nM?,F(xiàn)配現(xiàn)用。

2. 染色步驟

1) 細(xì)胞爬片生長(zhǎng) 24h,使其密度達(dá)到 50%匯合度。

2) 吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的 1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞 2 次。

3) 使用溶于 PBS 的 4%甲丨醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定 10min。 注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^(guò)程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。

4) 室溫條件下,用 PBS 清洗細(xì)胞 2~3 次,每次 10min。

5) 室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化處理 5min。

6) 室溫條件下,用 PBS 清洗細(xì)胞 2~3 次,每次 10min。

7) 取 200µl 配制好的 TRITC 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞,室溫避光孵育 30min(通常情況下, 4℃~37℃孵育皆可)。 注意:為了降低背景,可于 TRITC 標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液內(nèi)加入 1% BSA;另外,孵育過(guò)程中為了避免溶液揮 發(fā),可將蓋玻片轉(zhuǎn)移到一個(gè)密封的容器內(nèi)。

8) 用 PBS 清洗蓋玻片 3 次,每次 5min。

9) 使用 200µl DAPI 溶液(濃度:100 nM)對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,約 30s。

10) 用 PBS 清洗蓋玻片,然后倒置在已經(jīng)滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫 掉多余封片劑,然后用指甲油封片。此法制備的標(biāo)本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 個(gè)月內(nèi)可繼續(xù)做 F-actin 染色分析。 注意:也可以直接使用含有 DAPI 的抗熒光淬滅封片劑合并步驟 9)10),簡(jiǎn)化步驟。

11) 熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀(guān)察,選擇 TRITC 激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=540/570nm)和 DAPI 激 發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。


上海索寶生物科技有限公司

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